Detection of herpes simplex-1 and -2 and varicella zoster virus by quantitative real-time polymerase chain reaction in corneas from patients with bacterial keratitis / Detecção de vírus herpes simplex tipo 1 e 2 e varicella zoster por reação em cadeia de polimerase em tempo real em córneas de pacientes com ceratites bacterianas

ABSTRACT Objective: Bacterial keratitis occurs worldwide, and despite recent developments, it remains a potentially blinding condition. This study assesses the presence of herpes simplex virus (HSV-1 and -2) and varicella zoster virus (VZV) by quantitative real-time polymerase chain reaction (qPCR) in corneal scrapings from patients with bacterial keratitis. Methods: A total of 65 patients with clinical diagnoses of infectious corneal ulcers prospectively underwent clinical eye examinations. Corneal scrapings were investigated by Gram staining, Giemsa staining, culture, and qPCR (the study group). Risk factors and epidemiological data were recorded. The control group comprising 25 eyes with typical herpes dendritic keratitis was also analyzed by qPCR. Results: From the study group (n=65), nine patients (13.8%) had negative smears, cultures, and qPCR findings. Fifty-six (86.2%) patients had positive cultures: 51 for bacteria, 4 for fungi, and 1 for amoebae. Of the patients who had positive bacterial cultures, qPCR identified 10 patients who were also positive for virus: one for VZV and nine for HSV-1. Of the 25 patients in the control group, 21 tested positive for HSV-1 by qPCR analysis. Conclusions: Herpes may be present in patients with bacterial corneal ulcers, and qPCR may be useful in its detection.

RESUMO Objetivo: Ceratites bacterianas ocorrem mundialmente e apesar dos novos desenvolvimentos permanece como uma condição que pode levar à cegueira. Avaliar a presença de herpes simples (-1 e -2) e vírus varicella zoster (VZV) por reação em cadeia quantitativa de polimerase em tempo real (qPCR) em raspados corneanos de pacientes com ceratite bacteriana. Métodos: Sessenta e cinco pacientes com ceratite infecciosa foram submetidos a raspados corneanos estudados para gram, Giemsa, cultura e qPCR (grupo de estudo). Foram avaliados fatores de risco e epidemiológicos. O grupo controle foi composto por 25 casos de úlcera dendrítica típica por herpes analisados por qPCR. Resultados: Do grupo de estudo (n=65), nove pacientes (13,8%) apresentaram cultura, qPCR e raspado negativos. Cinquenta e seis (86,2%) pacientes apresentaram cultura positiva, 51 para bacteria, 4 para fungo e 1 para ameba. A qPCR identificou 10 pacientes do grupo de cultura positiva para bactéria que também foram positivos para vírus, um VZV e 9 para HSV-1. Dos 25 pacientes que compunham o grupo controle, 21 apresentaram qPCR positivo para HSV-1. Conclusão: Herpes pode estar presente em pacientes com úlceras de córnea bacterianas e a qPCR pode ser útil na sua detecção.

Estudio clínico y virológico en un grupo de niños chilenos con herpes ocular: análisis genómico de las cepas / Clinical-virological study in chilean children with ocular herpes: genomic analysis of strains

Objetivo: Caracterizar el diagnóstico de infección ocular por virus herpes simples (HSV) en un grupo de niños chilenos, mediante el estudio clínico y de laboratorio virológico. Métodos: La población estudiada comprendió niños menores de 15 años, con diagnóstico clínico de herpes ocular, que fueron atendidos por los autores y un grupo de oftalmólogos entrenados especialmente para el estudio. Junto con detallar el tipo de infección herpética, a todos los pacientes se les tomaron muestra para estudio virológico que incluyó estudio de cultivos celulares y posteriormente técnica de reacción en cadena de polimerasa (PCR), con el fin de tipificar las cepas y características genómicas del virus infectante. Resultados: El estudio enroló 18 niños, cuyas edades fluctuaron entre los 40 días y 13 años, con una media de 6 años. De las formas clínicas observadas, la más frecuentes fueron la blefaritis y la queratitis dendrítica constituyendo en 27 y 22 por ciento de los casos, respectivamente. El diagnóstico de HSV fue confirmado en 15 de 18 pacientes, constituyendo un 83 por ciento de positividad. 14 de 15 casos correspondieron a HSV tipo 1, y en un niño se diagnóstico infección por HSV tipo 2. Los antecedentes clínicos de este caso confirmaron que se trataba de una infección perinatal, lo que permitió instaurar el tratamiento en forma oportuna. El estudio permitió identificar un caso de excreción ocular viral asintomática, lo que sumando a un cuadro de recurrencias múltiples obligó a indicar terapia profiláctica permanente con aciclovir. Conclusiones: La blefaritis y queratitis herpética constituyeron en conjunto el 70 por ciento de los casos. El rendimiento celular y PCR fue elevado en los casos con alto índice de replicación viral, como la queratitis y blefaritis. En los casos con menor replicación, como queratitis estromal o conjuntivitis, el estudio PCR demostró una mayor sensibilidad que el estudio en cultivo celular. La presencia de un caso de infección perinatal por HSV-2 pudiera ser indicativo de un aumento en la frecuencia de esta forma de presentación.

Estudio clínico virológico en un grupo de niños chilenos con herpes ocular: análisis genómico de las cepas / Clinic-virological study in chilean children with ocular herpes: genomic analysis of strains

Se estudiaron todos los niños menores de 15 años, con diagnóstico clínico de herpes ocular, efectuado por oftalmólogos de servicios oftalmológicos de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile y de un centro oftalmológico privado, desde abril de 1995 a abril de 1996, en Santiago de Chile. Se consignó información clínico epidemiológica, examen clínico y se obtuvieron mediante torulado muestras de conjuntiva y/o córnea del ojo afectado, conjuntiva del ojo sano y mucosa oral, utilizando una técnica estándar. Se efectuó aislamiento viral en células VERO (ATCCL81). En caso de detectarse efecto citopático, el aislado viral se propagó y almacenó para su estudio. Se efectuó identificación y tipificación viral con anticuerpos tipo específicos marcados con fluoresceína (DAKO). Se efectuó amplificación génica y análisis con enzimas de restricción. Resultados: se determinó que 14/15 aislados correspondían a herpes simplex tipo I (HSV-I) y uno a HSV-2, el cual muy probablemente correspondió a una infección perinatal por este virus. Las cepas de HSV-I presentaron patrones genómicos distintos entre sí y con la cepa de referencia norteamericana HSV-IF. La forma de presentación más frecuente fue de blefaritis herpética, seguida por la dendrita corneal, tanto en el primer espisodio clínico como en las recurrencias y en estas últimas, tiende a presentarse la misma forma clínica. La tasa de recurrencia es mayor que en la población adulta. La infección fue unilateral con la excepción de un caso con distintas formas de presentación en cada ojo y aislamiento simultáneo bilateral. En dos casos fue posible detectar excreción oral del virus subclínica